五步蛇雌雄異體,外表上無明顯區(qū)別。一般雄性尾基部略膨大,尾較雌性略長(zhǎng)(尾下鱗略多些)。五步蛇出生后2~3年性器官已發(fā)育成熟,小型蛇較大型蛇成熟快,生活在寒冷地區(qū)的蛇成熟比熱帶的蛇要慢。五步蛇是體內(nèi)受精的動(dòng)物,交配期一般在春末夏初出蟄后進(jìn)行,秋冬之交配現(xiàn)象較少。各種蛇類的生殖季節(jié)不盡相同,如眼鏡蛇的交配期一般是在4~6月;銀環(huán)蛇多在8~10月;尖吻蝮在10~11月;蝮蛇和蝰蛇在5~9月等。雄蛇有一對(duì)交接器,在肛孔兩側(cè),由內(nèi)向外翻出。每次交配時(shí),只使用一側(cè)的交接器,交接器平時(shí)藏在雄蛇尾基部?jī)?nèi)。在交接時(shí)伸出來,交接器上有倒鉤和棘狀突起,如翠青蛇的雄性交接器端膨大,每個(gè)棘上生有若干棘突(圖6)。雌蛇性器官發(fā)育成熟時(shí),游到外面的草叢中,不斷地將性腺分泌的激素釋放出來,雄蛇接到求偶信號(hào)后會(huì)立即順著雌蛇尾基部性腺釋放出來的性外激素尋找到雌蛇,伏在雌蛇身上,而雌蛇伏地不動(dòng),有時(shí)雌雄蛇還把身子直立起來。當(dāng)雄蛇交接器插入雌蛇泄殖腔時(shí),情緒異常激動(dòng),不斷搖頭擺尾并主動(dòng)纏繞雌蛇,蛇交配時(shí)其性情要比平時(shí)暴躁,這時(shí)若遇外面的驚擾,會(huì)發(fā)出猛烈的攻擊。1條雄蛇可與多條雌蛇交配,而雌蛇只交配1次,通常不再與第2條雄蛇交配。在人l:飼養(yǎng)條件下,平時(shí)應(yīng)將雌雄分開飼養(yǎng),到交配期才將雄蛇放刮雌蛇群中。一般性別比例以雄雌比例為1:9~10較為合適,交配期過后再將雌蛇分開飼養(yǎng)。各種蛇的交配時(shí)間長(zhǎng)短也不相同,一般交配時(shí)問為半小時(shí)以上;有的延續(xù)數(shù)小時(shí),長(zhǎng)的可達(dá)24小時(shí)。據(jù)資料報(bào)道,成都動(dòng)物園曾觀察到飼養(yǎng)的黑眉錦蛇交配時(shí)間從上午8時(shí)到下午7時(shí),延續(xù)11小時(shí)之久。蛇交配后不一定立即發(fā)生受精作用,精子可在雌體輸卵管里存活4~5年,人工飼養(yǎng)的雌蛇交配1次后可連續(xù)3~4年產(chǎn)出受精卵。例如眼鏡蛇的交配期在4~6月,翌年6~8月產(chǎn)卵;銀環(huán)蛇的交配期在6~8月,翌年5~8月產(chǎn)卵;尖吻蝮的交配期在10~11月,翌年6~8月產(chǎn)卵;蝰蛇的交配期在5~7月,翌年8~10月產(chǎn)卵。