五步蛇雌雄異體，外表上無明顯區(qū)別。一般雄性尾基部略膨大，尾較雌性略長(尾下鱗略多些)。五步蛇出生后2～3年性器官已發(fā)育成熟，小型蛇較大型蛇成熟快，生活在寒冷地區(qū)的蛇成熟比熱帶的蛇要慢。五步蛇是體內(nèi)受精的動(dòng)物，交配期一般在春末夏初出蟄后進(jìn)行，秋冬之交配現(xiàn)象較少。各種蛇類的生殖季節(jié)不盡相同，如眼鏡蛇的交配期一般是在4～6月；銀環(huán)蛇多在8～10月；尖吻蝮在10～11月；蝮蛇和蝰蛇在5～9月等。雄蛇有一對(duì)交接器，在肛孔兩側(cè)，由內(nèi)向外翻出。每次交配時(shí)，只使用一側(cè)的交接器，交接器平時(shí)藏在雄蛇尾基部內(nèi)。在交接時(shí)伸出來，交接器上有倒鉤和棘狀突起，如翠青蛇的雄性交接器端膨大，每個(gè)棘上生有若干棘突(圖6)。雌蛇性器官發(fā)育成熟時(shí)，游到外面的草叢中，不斷地將性腺分泌的激素釋放出來，雄蛇接到求偶信號(hào)后會(huì)立即順著雌蛇尾基部性腺釋放出來的性外激素尋找到雌蛇，伏在雌蛇身上，而雌蛇伏地不動(dòng)，有時(shí)雌雄蛇還把身子直立起來。當(dāng)雄蛇交接器插入雌蛇泄殖腔時(shí)，情緒異常激動(dòng)，不斷搖頭擺尾并主動(dòng)纏繞雌蛇，蛇交配時(shí)其性情要比平時(shí)暴躁，這時(shí)若遇外面的驚擾，會(huì)發(fā)出猛烈的攻擊。1條雄蛇可與多條雌蛇交配，而雌蛇只交配1次，通常不再與第2條雄蛇交配。在人l：飼養(yǎng)條件下，平時(shí)應(yīng)將雌雄分開飼養(yǎng)，到交配期才將雄蛇放刮雌蛇群中。一般性別比例以雄雌比例為1：9～10較為合適，交配期過后再將雌蛇分開飼養(yǎng)。各種蛇的交配時(shí)間長短也不相同，一般交配時(shí)問為半小時(shí)以上；有的延續(xù)數(shù)小時(shí)，長的可達(dá)24小時(shí)。據(jù)資料報(bào)道，成都動(dòng)物園曾觀察到飼養(yǎng)的黑眉錦蛇交配時(shí)間從上午8時(shí)到下午7時(shí)，延續(xù)11小時(shí)之久。蛇交配后不一定立即發(fā)生受精作用，精子可在雌體輸卵管里存活4～5年，人工飼養(yǎng)的雌蛇交配1次后可連續(xù)3～4年產(chǎn)出受精卵。例如眼鏡蛇的交配期在4～6月，翌年6～8月產(chǎn)卵；銀環(huán)蛇的交配期在6～8月，翌年5～8月產(chǎn)卵；尖吻蝮的交配期在10～11月，翌年6～8月產(chǎn)卵；蝰蛇的交配期在5～7月，翌年8～10月產(chǎn)卵。