雞新城疫(ND)是由雞新城疫病毒(NDV)引起的一種急性、熱性、敗血性、烈性傳染病,我國采取以疫苗免疫為主的綜合防控措施,有效控制了該病在國內(nèi)的大規(guī)模流行,但新城疫疫苗免疫失敗現(xiàn)象仍時有發(fā)生。雛雞體內(nèi)母源抗體水平是不同的,統(tǒng)一接種新城疫免疫疫苗后,對接種疫苗可產(chǎn)生不同程度的干擾因素.尤其雛雞母源抗體水平偏高時,將嚴(yán)重干擾免疫接種的抗體效力,使其發(fā)揮不出應(yīng)有的免疫作用,導(dǎo)致整個雞免疫水平參差不齊。青海省湟源縣雞新城疫免疫抗體監(jiān)測結(jié)果與分析，一起來了解一下！

1、材料與方法

1.1　血清樣品來源

于2014-2016年期間共采集湟源縣雞新城疫疫苗免疫后的血清樣品3242份。

1.2　試劑和儀器

雞新城疫血凝抑制抗原、陽性血清、陰性血清購自青島易邦生物工程有限公司；114小型臺式離心機為SIGMA公司產(chǎn)品；量程為5-50μL可調(diào)八道移液器為Thermo公司產(chǎn)品；ZW-A型微量振蕩器為常州華冠儀器有限公司產(chǎn)品；一次性96孔“V型”微量反應(yīng)板為南通市衛(wèi)寧實驗器材有限公司產(chǎn)品。

1.3　血清樣品的制備

利用一次性1．omL注射器從免疫雞的翅靜脈處采集血液0.　5-0.8mL，將其全部打入1.5mL離心管中，將離心管依次置于37℃溫箱th，2-8℃冰箱2h后，3000r／min離心10min，小心吸取上清液存入另一個1.5mL離心管中，即得血清樣品，　20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4血凝抑制試驗（HI）操作方法與判定標(biāo)準(zhǔn)

1.　4.1　1%雞紅細胞懸液的制備

在一次性5.0mL注射器中吸入2．o　mL抗凝劑后，于健康公雞翅靜脈處采集血液2．O　mL，分別采集3只公雞，將3只雞抗凝血液全部置于50　mL離心管中，加入10倍體積的o．Ol　mol／L、pH　7.2的滅菌PBS，混合均勻，2000　r／min離心10min，小心吸取上清液舍棄，下層紅細胞用40.o　mL滅菌PBS重懸，2000　r／min離心10　min，上清液舍棄，利用滅菌PBS將下層紅細胞配制成1%雞紅細胞懸液，4℃保存?zhèn)溆?，于配置?dāng)天用完。

1.4.2　4個血凝單位抗原的制備

在96孔微量板的各孔加入25μL滅菌PBS，取25μL雞新城疫血凝抑制抗原加入第1孔內(nèi)，混勻后吸取25μL至第2孔，依次倍比稀釋至第11孔，各孔分別加入25μL　l%雞紅細胞懸液，微量振蕩器上搖勻，室溫靜置30　min后觀察結(jié)果，紅細胞完全凝集的較高稀釋度即為抗原的血凝效價。將抗原的血凝效價除以4即得4單位抗原的稀釋倍數(shù)，利用滅菌PBS配置4單位抗原。

1.4.3抗體效價的測定

在96孔微量板的各孔加入25μL滅菌PBS，取25μL血清樣品加入第1孔內(nèi)，混勻后吸取25μL至第2孔，依次倍比稀釋至第10孔，1-　11各孔分別加入25　μL　4單位抗原，微量振蕩器上搖勻，室溫靜置30　min。各孔分別加入25μL1%雞紅細胞懸液，微量振蕩器上搖勻，室溫靜置30　min后觀察結(jié)果，完全抑制4單位抗原凝集的血清較高稀釋度即為檢測樣品的HI抗體效價(log2)，當(dāng)血清樣品HI抗體效價≥4　log2判為陽性，＜4　log2判為陰性。

2、結(jié)果與分析

2..1　不同年份的檢測結(jié)果

如表1所示，共檢出陽性樣品2966份，平均免疫合格率為91.　49%　(2966　j3242)，其中2014年、2015年、2016年免疫合格率分別為88.　25%　(976j1106)、92.　07%(　940／1021)、94.17%(1050／1115)，免疫合格率自2014　-　2016年呈現(xiàn)出逐步升高的趨勢。

3、討論

疫苗免疫后抗體水平檢測可有效判斷疫苗的免疫效果，本次新城疫免疫效果監(jiān)測覆蓋了湟源縣2　014　-2　016最近3年的時間跨度，并且分別從養(yǎng)殖場和散養(yǎng)戶進行抽樣檢測，監(jiān)測結(jié)果能夠較好的反映出目前湟源縣新城疫疫苗的免疫效果。本次調(diào)查平均免疫合格率為91.　49%，遠遠超過了農(nóng)業(yè)部規(guī)定的免疫合格率在70%以上的標(biāo)準(zhǔn)。與國內(nèi)其他地區(qū)相比，也遠遠高于甘肅寧縣2015年平均為76.　31%免疫合格率[2]，略高于福建浦城縣2015年總體為91.　287%的免疫合格率[9]。表明湟源縣已全面開展雞新城疫的免疫工作，疫苗免疫程序比較合理，疫苗免疫效果較好。但本次調(diào)查中發(fā)現(xiàn)湟源縣規(guī)模養(yǎng)殖場的平均免疫合格率較散養(yǎng)戶高出8.　07個百分點，究其原因可能為：①在防控意識上，規(guī)模場的防控意識更強，投入了大量的人力財力，而散養(yǎng)戶的防控意識較淡薄，少免、漏免等情況時有發(fā)生；②在技術(shù)水平上，養(yǎng)殖場有獸醫(yī)專職人員負責(zé)防疫，技術(shù)水平較高，且經(jīng)常進行抗體檢測，能準(zhǔn)確把握免疫時機，而散養(yǎng)戶做不到抗體的實時監(jiān)測，無法掌握免疫前的抗體水平，往往盲目免疫；③在養(yǎng)殖環(huán)境上，規(guī)模場的飼養(yǎng)管理與環(huán)境衛(wèi)生均明顯好于散養(yǎng)戶，雞群的免疫力和抗病力較好，可有效降低免疫失敗。故對散養(yǎng)戶定期組織培訓(xùn)，提高其防疫意識和技術(shù)水平，逐步引導(dǎo)其向規(guī)模場方向發(fā)展已十分棘手和必要。