豬瘟(CSF)是由豬瘟病毒(CSFV)引起的一種急性或慢性、熱性和高度接觸傳染的病毒性疾病,又稱“豬霍亂”,是養(yǎng)豬業(yè)中常見的疾病,給養(yǎng)豬生產(chǎn)和發(fā)展帶來了巨大的損失。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)對(duì)永安市規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)戶的豬血清樣品等進(jìn)行檢測(cè),初步了解其豬瘟的抗體水平,比較二者之間的區(qū)別,并根據(jù)臨床實(shí)踐,分析造成差異的原因,為科學(xué)有效地防控豬瘟提供依據(jù)。下面具體來了解一下：規(guī)模化豬場(chǎng)與散養(yǎng)戶豬瘟免疫效果的比較。并總結(jié)了豬瘟免疫效果的提高方法，以便為豬瘟控制提供依據(jù)。

1、資料與方法

一般資料。在2015年3月至2016年3月期間，選取黑龍江省齊齊哈爾市10個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)(598頭豬)與68個(gè)散養(yǎng)戶(266頭豬)。其中規(guī)?；i場(chǎng)中能繁母豬227頭，保育豬129頭，育肥豬86頭，后備豬156頭。散養(yǎng)戶中能繁母豬76頭，保育豬65頭，育肥豬125頭。對(duì)864頭健康豬在28-30天之前進(jìn)行豬瘟疫苗免疫，并采集864份血樣，對(duì)其免疫效果進(jìn)行對(duì)比分析。

方法。檢測(cè)需要的試劑與儀器包括：ELISA檢測(cè)試劑盒、離心機(jī)、加樣器、隔水式普通培養(yǎng)箱、快速檢測(cè)儀、微量振蕩器等。將采集的血樣經(jīng)過無菌離心吸取血清制成樣品，并對(duì)每份樣品做好標(biāo)記，放置在冰箱中冷藏處理。并從冰箱中取出試劑盒，放置在實(shí)驗(yàn)室中，確保溫度恢復(fù)到室溫(15　-26℃)，并對(duì)試劑進(jìn)行觀察，如果試劑中出現(xiàn)未溶解的固體物質(zhì)，需要繼續(xù)回溫溶解。并放置在微量震蕩器中維持0.5-1　min的震蕩處理，并按照先后順序擺好備用。并對(duì)陰性與陽性標(biāo)準(zhǔn)血清標(biāo)記好加樣位置，并對(duì)反應(yīng)板符號(hào)做好標(biāo)記。在反應(yīng)板中加入50　uL血清稀釋液，并依此加入陽性與陰性血清以及待檢血清樣品各50　uL，并對(duì)其進(jìn)行震蕩處理0.5-1　min，貼上封板膜，并放置在25℃隔水式普通培養(yǎng)箱中孵育1h。之后重復(fù)清洗，加入100　uL顯色底物，重新孵育15　min，之后加入50　uL終止液，震蕩30　s，對(duì)其OD值進(jìn)行檢測(cè)。

判斷標(biāo)準(zhǔn)。樣品PC低于40%表示為陰性；樣品PC在40%及以上表示為陽性。其中樣品PC計(jì)算為：（陰性對(duì)照血清OD　450　nm平均值樣品OD　450　nm值）／（陰性對(duì)照血清OD　450　nm平均值　陽性對(duì)照血清OD　450　nm平均值）×100%。

2、結(jié)。。

規(guī)?；i場(chǎng)中598頭豬豬瘟抗體合格率為96.15%(575　j598)，其中能繁母豬合格218頭、保育豬合格119頭、育肥豬合格84頭、后備豬合格154頭；散養(yǎng)戶266頭豬的豬瘟抗體合格率為77.　44%　(206/266)，其中能繁母豬合格67頭、保育豬合格49頭、育肥豬合格90頭。

3、討論

在規(guī)?；i場(chǎng)中，能繁母豬與后備豬的抗體水平較好，其主要是與規(guī)?；i場(chǎng)重視種豬健康有著密切聯(lián)系。根據(jù)結(jié)果顯示，規(guī)模化豬場(chǎng)的豬瘟免疫效果明顯優(yōu)于散養(yǎng)戶豬瘟免疫效果。散養(yǎng)戶在養(yǎng)殖的時(shí)候，需要充分借鑒規(guī)模化豬場(chǎng)的養(yǎng)殖經(jīng)驗(yàn)，要不斷提高免疫技術(shù)，養(yǎng)殖戶要重視豬瘟免疫，對(duì)免疫程序進(jìn)行改進(jìn)，并注意飲食健康，對(duì)豬圈的環(huán)境衛(wèi)生進(jìn)行改善，以便提高豬瘟的免疫效果，確保疫病發(fā)生率的降低，從而促進(jìn)養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)效益顯著提高，降低不必要的損失。

規(guī)?；i場(chǎng)需要維持現(xiàn)有的防疫水平，確保豬瘟免疫效果維持良好的狀態(tài)。而散養(yǎng)戶需要根據(jù)自身的實(shí)際情況，在豬瘟免疫、科學(xué)飼養(yǎng)以及生豬采買的時(shí)候嚴(yán)格把控。需要對(duì)種豬的健康進(jìn)行重視，以便切斷感染源頭。在購買種豬的時(shí)候，避免從疫區(qū)或剛治療好豬瘟的豬場(chǎng)購買。在種豬運(yùn)輸?shù)倪^程中，需要對(duì)運(yùn)輸工具進(jìn)行徹底消毒，購買回豬場(chǎng)的時(shí)候，需要對(duì)隨行人員與車輛進(jìn)行徹底消毒，之后將豬送往豬場(chǎng)的隔離區(qū)。在隔離區(qū)飼養(yǎng)1個(gè)月所有的時(shí)間對(duì)其進(jìn)行免疫接種后，待抗體檢測(cè)合格方可進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)飼養(yǎng)。

豬瘟一直以來是威脅我縣養(yǎng)豬業(yè)的頭號(hào)疾病,對(duì)于豬瘟的控制目前主要還是依靠豬瘟疫苗的免疫預(yù)防,豬瘟疫苗免疫效果的好壞直接關(guān)系到全縣豬瘟防疫的效果以及生豬感染壓力的大小,也關(guān)系到我縣畜牧養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展。豬場(chǎng)及農(nóng)村散養(yǎng)戶定期對(duì)豬瘟疫苗效果檢測(cè)評(píng)估是十分必要的。目前,用于豬瘟疫苗免疫效果評(píng)估的方法很多,如何選擇一種切合我縣實(shí)際的檢測(cè)方法是科學(xué)評(píng)估的首要問題。我們采用兩種常用的評(píng)估方法(免疫金標(biāo)試紙檢測(cè)和正向間接血凝試驗(yàn))對(duì)全縣農(nóng)村散養(yǎng)戶的336份血清樣品進(jìn)行了豬瘟免疫效果平行對(duì)比檢測(cè)試驗(yàn)，這對(duì)于以后我縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心能夠及時(shí)準(zhǔn)確掌握生豬豬瘟免疫效果，具有非常深遠(yuǎn)的指導(dǎo)意義。
1、材料與方法
1.1材料
1.1.1 被檢樣品采自全縣12個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)農(nóng)村散養(yǎng)戶不同日齡的豬，其中仔豬(20～45日齡)96份, 生產(chǎn)母豬102份,肥豬(70～160日齡)138份。散養(yǎng)戶提供的336份血清均為豬瘟免疫首免20日齡左右,二免在65日齡免疫后18～20天所采的仔豬全血樣品。
1.1.2 豬瘟正向間接血凝試劑盒(包括豬瘟正向間接血凝抗原、豬瘟稀釋液、豬瘟陰、陽性血清)購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所,試劑盒批號(hào):20080812 。
1.1.3 96孔血凝板(110。V型)，飛鴿牌臺(tái)式離心機(jī)，精密移液器(5～50μl、20～200μl)，微量振蕩器。
1.1.4 豬瘟抗體免疫金標(biāo)試紙條，購自深圳市康百得生物科技有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20081020。
1.2 方法
將336份全血樣品放入離心機(jī)離心，5分鐘后吸取上層血清液，置于試管架上備用。在金標(biāo)檢測(cè)卡的橢圓形加樣孔內(nèi)加入2～3滴(50～100μ1)待檢豬血清。將檢測(cè)卡平放在平面上，在室溫下靜置8～15min判定結(jié)果。加樣后8～15min可與金標(biāo)試紙附帶的參照卡的色帶滴度進(jìn)行參考比較，當(dāng)被檢樣品檢測(cè)線（T）條帶的色澤大于參照卡中豬瘟抗體效價(jià)為1∶16 時(shí)，說明檢測(cè)樣品中豬瘟抗體的滴度較高，如果低于1∶16 則表示被檢豬的豬瘟抗體水平過低，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行豬瘟疫苗接種。正向間接血凝試驗(yàn)操作順序如下:加稀釋液→加被檢血清→在血凝板上倍比稀釋被檢血清、陽性血清→加血凝抗原→震蕩搖勻→37℃下靜置1～2h→結(jié)果判定。以50%紅血球出現(xiàn)凝集的血清最大稀釋倍數(shù)為該血清的血凝效價(jià)。血凝效價(jià)達(dá)1∶16為免疫合格,1∶16 以下為免疫不合格。
2、 結(jié)果與分析

從上述表格可以得知：抗體金標(biāo)檢測(cè)仔豬豬瘟抗體效價(jià)達(dá)到保護(hù)線的為82%,正向間接血凝檢測(cè)合格的為81%；育肥豬金標(biāo)檢測(cè)抗體水平達(dá)到有效保護(hù)值(1∶16)的為91%,正向間接血凝為91%；金標(biāo)抗體檢測(cè)生產(chǎn)母豬免疫合格的為84%,正向間接血凝為86%。
通過數(shù)據(jù)比較表明，免疫金標(biāo)試紙檢測(cè)與豬瘟正向間接血凝試驗(yàn)的結(jié)果基本符合，試驗(yàn)結(jié)果可靠。
3 、討論
3.1 從上述實(shí)驗(yàn)中可以看出，我縣現(xiàn)有的疫病預(yù)防免疫程序中，總有一部分豬只免疫不合格，造成這種情況的因素可能與基層防疫員的技術(shù)、操作、疫苗用量、疫苗質(zhì)量等有關(guān)。也可能是廣泛存在的豬繁殖與呼吸障礙綜合癥、圓環(huán)病毒感染而破壞了豬的免疫系統(tǒng)，造成免疫抑制。
3.2 從操作方法上，免疫金標(biāo)試紙條操作簡便，更重要的是檢測(cè)時(shí)間很短，使我們能及時(shí)做好疾病診斷、抗體監(jiān)測(cè)。間接血凝是通過血球凝集程度來判斷結(jié)果的，實(shí)驗(yàn)員的判斷力不一樣，就很有可能出現(xiàn)不同的結(jié)果，即便對(duì)于同一操作者，每次的試驗(yàn)判斷結(jié)果都可能有一定的偏差。
3.3 從經(jīng)濟(jì)成本上，免疫金標(biāo)試紙檢測(cè)也能體現(xiàn)出一定的優(yōu)勢(shì)，它能大量成批的檢測(cè)，也能單獨(dú)進(jìn)行檢測(cè)，且不造成浪費(fèi)。而間接血凝所需抗原一經(jīng)開啟就必須一次用完，若檢測(cè)量較小的情況下，就會(huì)造成很大的浪費(fèi)。
4、 結(jié)論
綜上所述，豬瘟抗體金標(biāo)試紙檢測(cè)法，憑借其操作簡便，不需要技術(shù)含量很高的實(shí)驗(yàn)員，結(jié)果直觀，反應(yīng)時(shí)間短的優(yōu)勢(shì)，非常符合我縣的實(shí)際需要。鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)站，養(yǎng)殖場(chǎng)都可推廣應(yīng)用，對(duì)我縣應(yīng)對(duì)重大動(dòng)物疫病時(shí)的應(yīng)急反應(yīng)能力，將起到舉足輕重的作用。