張 磊 劉兆宇 （黑龍江省二九一農(nóng)場畜牧獸醫(yī)科 黑龍江集賢 155923）

本病的病原為冠狀病毒科冠狀病毒屬中的成員。本病毒對犬、貉、狐貍等犬科動物均感染，不同品種、性別、年齡的犬都可感染，但幼犬最易感，發(fā)病率和死亡率都很高。此病不分季節(jié)，一年四季均能發(fā)生，但以冬季多發(fā)。氣候突變，衛(wèi)生條件差，犬群密度過大，斷奶轉(zhuǎn)舍，長途運輸?shù)染烧T發(fā)本病。病犬和帶毒犬是主要傳染源。傳染的途徑是經(jīng)呼吸道、消化道向外界排出病毒，污染飼料、飲水、用具、犬舍、運動場等，從而傳染給健康犬和其他易感動物。

1 臨床癥狀

人工感染的犬潛伏期為1~2天，自然感染的犬潛伏期為1~5天。該病傳播迅速，一旦出現(xiàn)病犬，可迅速蔓延全群。病犬主要表現(xiàn)為嘔吐和腹瀉。嚴(yán)重者精神不振，呈睡眠狀態(tài)，食欲減少或廢絕，多數(shù)無體溫變化，白細(xì)胞數(shù)正常，口渴，鼻鏡干燥，嘔吐持續(xù)數(shù)天后，出現(xiàn)腹瀉，糞便為粥樣或水樣，呈橘紅色或暗褐色，惡臭，混有粘液或少量血液。病犬迅速脫水，體重減輕，多數(shù)病犬在7~10天恢復(fù)，有些病犬特別是幼犬在發(fā)病后1~2天內(nèi)死亡，成年犬的癥狀多輕微。發(fā)病初期白細(xì)胞減少，水和電解質(zhì)代謝紊亂。

2 病理學(xué)診斷

病犬主要表現(xiàn)為胃腸炎變化，腸壁變薄，腸管內(nèi)充滿白色、黃綠色或紫紅色血樣液體，腸黏膜充血、出血和脫落，胃黏膜出血和脫落，胃內(nèi)有粘液，膽囊腫大。犬小腸絨毛變短、融合，隱窩變深，絨毛長度與隱窩深度之比發(fā)生明顯變化，上皮細(xì)胞變性，胞漿內(nèi)且現(xiàn)空泡，黏膜固有層水腫，炎性細(xì)胞浸潤，上皮細(xì)胞變平，杯狀細(xì)胞的內(nèi)容物排空。

3 病原學(xué)診斷

病料的采集及處理，由于病犬自糞便中含有許多的病毒粒子，所以應(yīng)采集病犬的糞便，分離病毒。

病毒的分離，采用細(xì)胞培養(yǎng)方式進(jìn)行。取病犬的糞便，經(jīng)常規(guī)處理后，接種犬的原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞，如犬的原代腎細(xì)胞和胸腺細(xì)胞、胚胎、滑膜及A-72細(xì)胞等均易感。用本病毒感染后第二天即可產(chǎn)生與冠狀病毒相似的細(xì)胞病變，然后取細(xì)胞培養(yǎng)物與已知的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清進(jìn)行中和試驗，鑒定本病毒。

電子顯微鏡檢查，取糞便用氯仿處理后低速離心，取上清液滴于銅網(wǎng)上，經(jīng)磷鎢酸負(fù)染后，用電子顯微鏡觀察病毒。可見本病毒多為球形或橢圓形，長75~120納米，寬75~80納米，有囊膜，其表面有20納米的纖突，纖突末端呈球狀，使整個纖突呈花瓣狀。

4 血清學(xué)診斷

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA），利用犬冠狀病毒高免血清提取IgG，以pH值為9.6的碳酸鹽緩沖液稀釋至1毫克/毫升，滴加于聚苯乙烯微量滴定板孔內(nèi)，每孔100微升，于4℃包被過夜，并用5%兔血清的PBS（pH值為7.4，含0.05%吐溫-20）37℃封閉1小時。然后用PBS洗滌液泡洗3次，每次3分鐘，甩干后加入1∶10烯釋的待檢病毒，每孔100微升，37℃感作2小時。再用上述洗滌液泡洗3次，隨后加入1∶400稀釋的抗冠狀病毒的酶標(biāo)抗體100微升，37℃感作2小時，如上泡洗3次以上。最后加鄰苯二胺-過氧化氫酶底物溶液100微升，室溫感作30分鐘，再加50微升2摩爾/升硫酸終止反應(yīng)。

結(jié)果判定，用肉眼觀察反應(yīng)物的顏色變化，來判斷陰性或陽性。

免疫熒光試驗。將自病犬采取的腎、脾等病料，制成小塊（www.nczfj.com），用冷凍切片機(jī)切片，然后將切好的組織片貼于潔凈的載玻片上，用風(fēng)扇吹干，再用丙酮固定。再將固定的標(biāo)本用PBS洗滌液洗3次，每次3分鐘，最后放蒸餾水中5~10分鐘脫鹽。將標(biāo)本放于室溫干燥或用吸水紙吸干。然后在標(biāo)本上滴加適量的熒光抗體，置濕盒中，放于37℃條件下感作30分鐘。再用PBS液將熒光抗體溶液輕輕沖洗掉，將其通過3杯PBS溶液，用吸紙吸干。最后用磷酸甘油滴于標(biāo)本上，蓋上蓋玻片，封片，放于熒光顯微鏡上進(jìn)行觀察。直接法應(yīng)設(shè)陰性、陽性標(biāo)本對照。

結(jié)果判定，在陽性標(biāo)本對照出現(xiàn)鮮亮的黃綠色熒光，陰性標(biāo)本無熒光時，如初檢樣本見有鮮亮黃綠色特異性熒光可判為陽性，不出現(xiàn)熒光者判為陰性。

5 治療

方法1：氟苯尼考注射液，每次肌肉注射20毫克/千克體重，每隔48小時1次，連用2次。方法2：葡萄糖甘氨酸溶液，配制方法為葡萄糖45克，氯化鈉9克，檸檬酸0.5克，甘氨酸7克，檸檬酸鉀0.2克，無水磷酸鉀43克，溶解于2 升溫開水中，溶解混勻，讓犬自由飲用，切勿灌服，可緩解癥狀。