| 雞α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒? |
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??本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫(yī)學診斷,具體說明書請聯(lián)系客服索取，本說明書是通用模板，有些數(shù)據(jù)不準確.
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被樣本抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的樣本呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm?波長下測定吸光度（OD?值），計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1.??血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2.??血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3.??細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.??組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5.??保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.酶標儀（450nm）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒溫箱
操作注意事項
1.??試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。
2.??實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.??濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。
4.??嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5.??所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱96孔配置48孔配置備注
微孔酶標板12孔×8條12孔×4條無
樣本稀釋液6mL3mL無
檢測抗體-HRP10mL5mL無
20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋
底物A6mL3mL無
底物B6mL3mL無
終止液6mL3mL無
封板膜2張2張無
說明書1份1份無
自封袋1個1個無
注：標準品濃度都不相同，麻煩聯(lián)系客服索取相應(yīng)說明書
試劑的準備
?20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1.??手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2.??自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
1.??從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.??設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.??樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4.??除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.??棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.??每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.??每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
結(jié)果判斷
?繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應(yīng)OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1.?準確性：標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。
2.?靈敏度：最低檢測濃度小于（參考說明書）
3.?特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4.?重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5.?貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.?有效期：6個月
免責聲明
1.??試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。??嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。
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